對(duì)蛋白亞細(xì)胞定位的認(rèn)知可能表明,蛋白可能在許多細(xì)胞進(jìn)程中發(fā)揮作用。如果與下面所列的其中一種細(xì)胞器特異性試劑共定位,那么可確認(rèn)目的蛋白的亞細(xì)胞位置。雖然這些細(xì)胞器標(biāo)記物可用作強(qiáng)大的免疫熒光工具,但它們還可用作碎裂細(xì)胞裂解物的蛋白質(zhì)印跡對(duì)照。
這些蛋白的表達(dá)可能在不同細(xì)胞和組織中有所不同。
熒光蛋白的發(fā)光原理在于其發(fā)色基團(tuán)經(jīng)一定波長(zhǎng)的光(激發(fā)光)照射后被激活,并將能量以光能形式釋放,這時(shí)我們就能在熒光顯微鏡下看到日思夜想的熒光色啦!
但由于能量不能全以光的形式輻射出來(lái),所以熒光蛋白的發(fā)射光(熒光)的波長(zhǎng)比激發(fā)光長(zhǎng)。
那么我們是怎么將熒光蛋白分類(lèi)的呢?通常,人們按發(fā)射波長(zhǎng)來(lái)分類(lèi)并定義其顏色(下圖)。
RFPs(紅色熒光蛋白):
mCherry具有優(yōu)異光穩(wěn)定性,通用紅色單體(但融合表達(dá)時(shí)有較弱的齊聚效應(yīng))
tdTomato具有mCherry相同的光穩(wěn)定性,亮度強(qiáng),是追蹤表達(dá)水平的理想選擇,但為串聯(lián)二聚體,可以在融合標(biāo)簽大小不干擾蛋白質(zhì)功能的情況下使用
mStrawberry信號(hào)亮的紅色單體,但光穩(wěn)定性要弱于mCherry
DsRed是細(xì)胞毒性小的RFP
mApple在蛋白的融合表達(dá)中是mCherry不錯(cuò)的替代物,但其光穩(wěn)定性要遠(yuǎn)弱于mCherry
mKate2從參數(shù)方面考量是綜合亮度、光穩(wěn)定性和齊聚性的RFP。
OFPs(橙色熒光蛋白):
mOrange橙色單體
YFPs(黃色熒光蛋白):
mVenus是亮度*的黃色單體
GFPs(綠色熒光蛋白):
EGFP
BFPs(藍(lán)色熒光蛋白):
mTagBFP2穩(wěn)定,成熟快、亮度極亮的藍(lán)色單體
上面是通用一些熒光蛋白參數(shù),再好的載體也需要找對(duì)合適的光源,光源的選擇對(duì)于載體信號(hào)的激發(fā)也是*的,美國(guó)LUYOR公司實(shí)驗(yàn)室儀器事業(yè)部致力于研究和開(kāi)發(fā)熒光觀測(cè)裝備,其產(chǎn)品系列有 LUYOR-3415RG雙熒光蛋白觀測(cè)燈,LUYOR-3430、LUYOR-3260單熒光蛋白觀測(cè)手電筒。熒光是各種各樣細(xì)胞生物學(xué)、神經(jīng)系統(tǒng)學(xué)及其他領(lǐng)域研究中的一種強(qiáng)大和廣泛使用的工具。LUYOR的LUYOR-3415RG和LUYOR-3430、LUYOR-3260除了可用于篩選轉(zhuǎn)基因生物外,還可以用于樣本的預(yù)篩選、輔助解剖、用于珊瑚研究等
LUYOR-3415RG雙熒光蛋白觀察燈的用途:
用于檢測(cè)、篩選轉(zhuǎn)綠色熒光蛋白(GFP)和紅色熒光蛋白(DsRed)基因的植物、動(dòng)物及微生物,如水稻、玉米、斑馬魚(yú)、小鼠、細(xì):菌、真菌等等...
LUYOR-3415RG雙熒光蛋白觀察燈的產(chǎn)品優(yōu)勢(shì):
1. 大功率輸出,無(wú)需暗室,也可輕松激發(fā)熒光。
2.檢測(cè)效率高,黑暗中檢測(cè)一目了然
3.LED壽命50000h,且系統(tǒng)穩(wěn)定,可長(zhǎng)時(shí)間使用
4.直接檢測(cè),而無(wú)需用底物顯色,所以安全,對(duì)被檢測(cè)對(duì)象無(wú)傷害
激發(fā)光源激發(fā)出綠色熒光時(shí),用黃色濾光鏡觀測(cè),可檢測(cè)含綠色熒光蛋白(GFP)的生物;激發(fā)光源激發(fā)紅色熒光時(shí),用紅色濾光鏡觀測(cè),可檢測(cè)含紅色熒光蛋白(DsRed)的生物。
注:
1. LUOYR-3415R用于觀測(cè)綠色熒光蛋白
GFP:綠色熒光; fluorescein熒光素
2. LUOYR-3415C用于觀測(cè)黃色熒光蛋白
YFP:黃色熒光蛋白; Venus:金色; Lucifer Yellow:熒光黃
3. LUOYR-3415G用于觀測(cè)紅色熒光蛋白
DsRed:紅色熒光蛋白; TdTomato:番茄紅
4. LUOYR-3415V用于觀測(cè)紫色熒光蛋白
CFP:青色熒光蛋白; BFP:堿性胎兒蛋白
5. LUOYR-3415U用于觀測(cè):
DAPI:藍(lán)色熒光
LUYOR-3415熒光蛋白激發(fā)光源的物理技術(shù)參數(shù):
波長(zhǎng):可任意選擇2種波長(zhǎng):365nm,400nm, 450nm, 485nm,520nm
質(zhì)量:凈重0.9kg,毛重:4kg,尺寸:180x200mm(長(zhǎng)x高),頭部直徑120mm。
功率:?jiǎn)尾ㄩL(zhǎng)15w,總功率27w。
輸入電壓:交流100-260v,頻率50/60Hz。
包裝箱尺寸:400x300x150mm(長(zhǎng)x寬x高)
距燈150mm處照射直徑為180mm。
LUYOR-3415熒光蛋白激發(fā)光源的標(biāo)準(zhǔn)配置:
luv-50觀察眼鏡,luv-30觀察眼鏡,說(shuō)明書(shū),合格證,保修卡,鋁合金手提箱。
LUYOR-3415熒光蛋白激發(fā)光源的主要產(chǎn)品應(yīng)用:
檢測(cè)轉(zhuǎn)綠色熒光蛋白(GFP)基因、紅色熒光蛋白(DsRed)基因植物:水稻、小麥、玉米、大豆、棉花、擬南芥
檢測(cè)轉(zhuǎn)GFP、DsRed基因動(dòng)物:小鼠、兔子、猴子等;
檢測(cè)轉(zhuǎn)GFP、DsRed基因微生物:細(xì)菌、真菌、酵母等;
檢測(cè)GFP、DsRed基因組織特異性表達(dá);
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